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pcr扩增仪操作过程及步骤先容
发表日期:2022/4/14 来源:托普云农 浏览次数:1148次

        PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物”。
        pcr扩增仪操作过程及步骤:

        1、 首先准备好反应管;
        2、 打开机盖,将反应管平稳、端正的置入,盖好机盖;
        3、 打开电源开关,按照机器屏幕显示的提示设定程序,用proceed键启动扩增,结束时出现“complete”,待风机停止工作,关闭电源。
        pcr扩增仪原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物 。先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链,然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物,即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段,一般需20-30个碱基对,过少则难保持与DNA单链的结合。引物与互补DNA结合后,以靶DNA单链为模板,经反链杂交复性(退火),在Taq DNA聚合酶的作用下以4种三磷酸脱氧核苷(dNTP)为原料按5'到3'方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。然后又开始第二次循环扩增。引物在反应中不仅起引导作用,而且起着特异性的限制扩增DNA片段范围大小的作用。新合成的DNA链含有引物的互补序列,并又可作为下一轮聚合反应的模板。如此重复上述DNA模板加热变性双链解开—引物退火复性—在DNA聚合酶作用下的引物延伸的循环过程,使每次循环延伸的模板又增加1倍,亦即扩增DNA产物增加1倍,经反复循环,使靶DNA片段指数性扩增。
        pcr扩增仪操作过程及步骤以及原理,小编都先容完毕了,希翼对大家有所帮助。

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